由医疗质量检测技术及测试仪器展知悉，立式灭菌锅多用于QC实验室，主要用于部件、培养基等的灭菌。

今天主要聊下常见的一些测试项目。

1、安装确认（这些都是套路，可以跳过）

IQ应包括但不限于以下内容：

a、确认部件、仪表、设备、管道工程和公用设施是否已根据图纸及规范进行了正确安装

b、确认是否已根据预先定义的标准进行了正确安装

c、收集和整理供应商的操作和工作指导以及维护要求

d、仪表的校准

e、检查制造材料

2、运行确认

OQ应包括但不限于以下内容（若适用，看不同品牌型号的灭菌锅）：

a、系统功能测试:

1）确认系统功能可以正常使用

2）参数设置可以适当程度地进行挑战性测试(如边界、范围、限制、无效输入测试等),以确认系统可以处理不正确的输入或规避不正确的使用导致的风险

b、报警联锁测试:根据报警联锁清单，对报警和联锁逐一确认

c、数据完整性测试:

1）用户管理及权限管理确认

2）安全策略的确认（比如账户密码累计错误次数、密码策略、自动注销功能）

3）电子签名确认

4）审计追踪确认：确认审计追踪数据是否涵盖了全部操作记录，以使其满足ALOCOA⁺的要求，该功能不可关闭、删除或修改，如果管理员可以，则审计追踪应该生成信息记录此类事件

5）系统安全性确认：断电前后参数是否一致，数据是否丢失

6）电子记录一致性确认：确认设备打印数据和电子数据的一致性

7）时钟确认：确认时钟的准确性。  

 8）备份还原确认：数据可备份，备份数据和原始数据一致，可还原，还原后的数据和原始数据一致

9）数据不可更改

d、空载温度分布测试（开始今天的主要内容）

1、测试前需要对测试仪器进行三点校准，通常低温点（90℃）、高温点（130℃）、测试点（121℃），探头温度在基准温度的±0.5℃之内并至少保持3分钟。

解读：校准范围需涵盖测试范围（具体值选多少，保持灵活，通常按上面这个来）

需要布置多少个点？根据GMP实施指南2023-无菌制剂上册

图片来源：GMP的那些事

腔体内部没啥复杂结构，均匀分布就行，见下图

图片来源：GMP的那些事

说明：这里虽然布置了10个点，那如果布置4+1+4（共9个点），可不可以呢？当然可以，这是个圆柱体，结构简单，蒸汽由底部加热产生并往上走，9个点其实足够了，再一个，1、指南不是法规 2、灭菌锅不是用于无菌药品生产（这里我想说个题外话，我们看各类法规指南的时候，第一个先看scope，不给自己加戏，有些情况下，可以作为参考，但不强制）。

2、确认参数无误后，将灭菌锅打印间隔设置为1min，测试仪器记录间隔设置为10s，启动灭菌程序，连续测试3次。

说明：

图片来源：GMP的那些事

记录间隔通常不超过1min，时间太长，可能会因为缺乏有效数据导致灭菌时间不满足预期要求，同时鉴于平衡时间的要求，需结合灭菌设备大小，灵活设置（比如＞800L的，可以15s记录一次，＜800L的可以5s记录一次，目的是为了很好的捕捉平衡时间，灭菌锅一般不涉及平衡时间，此处仅是举例）

3、可接受标准

a、在灭菌阶段，设备探头测得的温度维持在121 – 124℃之间，且灭菌时间至少30min

b、在灭菌阶段，热电偶测得的温度维持在121- 124℃之间，且灭菌时间至少30min

c、在灭菌阶段，灭菌锅打印输出所示的压力与灭菌锅打印输出所示温度下标准饱和蒸汽压力之间的偏差不大于13.0kpa（在不具备专用测试仪器的情况下，可以采用这种方式）

d、在维持时间内，所有热电偶，同一时刻温度差值不超过2°C。

e、灭菌锅的温度控制探头与附近的热电偶同一时候温度差值不大于1.0°C。

3、性能确认

3.1负载热穿透确认

3.1.1目的

确认在灭菌过程中，设备能在规定的温度范围内运行。

确认负载始终暴露在足够的致死率下。

3.1.2程序

用校准合格的探头进行负载热穿透确认。

布点图

Load 1 (Variable Loading: Variable Item + Fixed Position) 装载1，可变装载：物品可变+位置固定
Heat penetration probe location 热穿透探头位置
Maximum load 最大装载
探头 编号	位置	依据
T1/P1	控温探头附近	1、可能的低温点
T2	下层250mL玻璃瓶中	1、均一物品灭菌，探头均匀分布 2、那里可能夹带空气
T3	下层250mL玻璃瓶中
T4	下层250mL玻璃瓶中
T5	中层500mL玻璃瓶中	1、探针通常以几何方式放置在每种物品类型的代表性物品中 2、可能夹带空气
T6	中层枪头盒中
T7	上层抹布中	1、探针通常以几何方式放置在每种物品类型的代表性物品中
T8	上层泵头中
T9	上层抹布中
T10	上层镊子中
Minimum load 最小装载
探头 编号	位置	依据
T1/P1	控温探头附近	1、可能的低温点
T2	物品内部	1、最小F0所在的点 2、同最大装载时的布置方式保持一致

  在排水口附近处布置一个压力及温度传感器，确认参数无误后，设置打印间隔设置为1min，验证仪记录间隔设置为10s， 启动灭菌程序。 灭菌程序结束后，打印测试数据、BI布置图等作为附件。

3.1.3      可接受标准

在灭菌程序阶段，设备探头测得的温度维持在121℃- 124℃之间，且灭菌时间至少30min。

灭菌阶段，参考测量点测得的压力和参考测量点测得的温度下标准饱和蒸汽压力之间的偏差不大于13.0kpa(液体程序不适用)

所有穿透探头累计的F₀≥15min。

有关装载以及蒸汽温度和压力的关系的更多信息可以点击下方链接

1、蒸汽灭菌中的最大装载和最小装载

2、如何评价饱和蒸汽温度和压力的相关性

3.2微生物挑战试验

3.2.1目的
确认灭菌程序能完全杀灭生物指示剂中的芽孢。

3.2.2程序

此测试将与热穿透测试同时进行。

确保测试所使用的每个生物指示剂含有的嗜热脂肪地芽孢杆菌数应在1.0×10⁵cfu/支～5.0×10⁶ cfu/支，D₁₂₁值1.5min～3.0min，存活时间4.5min-14.0min，杀灭时间13.5min-32.0min。确认检测结果是否是标识值的50%-300%。

在每个热穿透探头尖端旁放置一份生物指示剂。每次培养时均保存一份同一批号的生物指示剂作为阳性对照品，一支作为阴性对照。

l生物指示剂编号：采用“装载编号-位置编号-运行次数”的方式对生物指示剂进行编号；例：“装载1第一次运行2号热穿透，生物指示剂的编号为1-2-1。”

•   每次测试结束，取出生物指示剂后应尽快进行培养，间隔时间最长不超过24h（培养时间不少于7天），培养结束后，记录最终结果。生物指示剂保持紫色为阴性用 “-”表示，由紫色变为黄色为阳性用 “+”表示。

• 3.2.3可接受标准

•  

  1、灭菌后的所有生物指示剂必须显阴性。

• 2、所有生物指示剂的阳性对照品必须显阳性，阴性对照必须显阴性。

说明：1、关于测试次数，初次验证中，通常需要连续3次成功的循环，再确认就不强求了，可基于风险制定合理的策略，用于QC实验室的灭菌锅装载一般不多，就不一定去选所谓的worst case了，对于灵活装载，可对最大、最小装载分别进行1次确认。

   2、关于BI的培养时间，为了避免审计时遇到挑战，还是培养7天保险一点，同时要做好防护措施，防止培养后，培养基被烘干

图片来源：GMP的那些事

注意点：包裹是一方面，另一方面捏的时候掌握下小技巧，轻轻的用剪刀将安瓿瓶底部捏碎（上面基本没破，像个盖子一样，减缓培养基的蒸发）

补充说明：对于实验室常见的灭菌锅而言，通常不具备真空功能，所以对装载非常讲究，设计不合理，就会导致灭菌失效，基于此，厂家一般也会在说明书中给出相关的建议

图片来源：GMP的那些事

热穿透测试表格示例

图片来源：GMP的那些事

想要了解更多请前往医疗质量检测技术及测试仪器展

文章来源：GMP的那些事

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